黄连木甲醇和水性叶提取物对不同抗生素抗性病原菌的抗菌和抗氧化性能评估

摘要：目前的研究旨在确定P. lentiscus叶提取物作为潜在的抗菌和抗氧化特性的生物活性。使用琼脂井法（根据临床和实验室标准研究所的指导）检查植物提取物对抗生素抗性金 黄色葡萄球菌、溶血性葡萄球菌、 铜绿假单胞菌和奇异变形杆菌的抗菌活性。3 种植物叶提取物的抗氧化潜力取决于它们将 Fe 3+转化为 Fe的能力 2+并清除DPPH自由基。在所研究的所有浓度下，与水提取物相比，甲醇叶提取物具有更高的总酚和类黄酮含量，以及更强的抗氧化和抗菌抑制活性。我们对铜绿假单胞菌的研究结果特别 有趣，因为甲醇提取物比参考抗生素更能抑制这种细菌。结果还证明了DPPH 自由基清除能力、还原能力和植物提取物的总酚和黄酮含量之间存在联系 (r > 0.97, R 2> 0.95，P = 0.01）。因此，所选植物的甲醇叶提取物可用作治疗多种疾病的有效抗氧化剂和抗菌剂。

关键词

抗氧化 活性,多酚,甲醇 叶 提取物, DPPH ,还原力

一、简介

尽管最近开发了强大的抗菌剂，但抗生素耐药性已显着升高 [ 1 ] [ 2 ] [ 3 ] [ 4 ]。耐抗生素 (ABR) 病原体，例如金黄色葡萄球菌[ 5 ]、金黄色葡萄球菌[ 6 ] [ 7 ]、铜绿假单胞菌[ 8 ] [ 9 ] 和奇异变形杆菌[ 10 ] ] 特别值得注意，因为越来越多的医院病原体（医院感染）正在对常规抗生素产生耐药性。最终，ABR 细菌的出现被认为是全世界最重要的死亡原因 [ 11 ]。因此，迫切需要新的治疗技术来消除致病性感染因子。植物的药用特性是一个巨大的、未开发的来源，为预防和治疗传染病的新物质提供了无限的机会。

植物来源的生物活性分子，主要是多酚，包括类黄酮和酚酸，是对抗攻击者，特别是微生物的天然抗菌剂的重要来源 [ 12 ] [ 13 ] [ 14 ] [ 15 ] [ 16 ]。多酚是植物中最大的一类生物活性化合物，作为次级代谢物形成，具有对病原微生物的保护特性 [ 17 ]。类黄酮、酚酸和维生素 C 等抗氧化剂对于抑制体外和体内各种氧化应激物 的形成很 重要由于它们具有清除活性氧 (ROS) 和自由基的能力 [ 18 ] - [ 23 ]。

Pistacia lentiscus ( P. lentiscus ) 是漆树科植物，广泛分布于地中海地区 [ 24 ] [ 25 ] [ 26 ] [ 27 ]。在传统医学中，P. lentiscus用于治疗由细菌和其他有害微生物引起的传染病 [ 28 ]。此外，P. lentiscus由几种生物活性化学成分组成。其中，类黄酮和酚酸具有强大的抗氧化能力 [ 29 ] [ 30 ] 除了免疫调节、抗炎 [ 31 ] [32 ] [ 33 ] [ 34 ]、保肝和抗菌作用是P. lentiscus叶子中最丰富的化合物[ 35 ] [ 36 ] [ 37 ] [ 38 ]。

因此，P. lentiscus叶提取物中生物活性化合物的表征对于满足对植物性药物不断增长的需求非常重要。尽管最近已经对药用植物进行了许多研究，因为它们作为天然产物的生物学特性和预防传染病的因素，但随着细菌耐药性的迅速出现，寻找新的和令人兴奋的天然化合物仍需要进一步努力。因此，本研究的目的是评估从 Al-abyar 森林（利比亚）地区采集的P. lentiscus的甲醇和水叶提取物作为抗抗生素病原菌的潜在抗菌剂和抗氧化剂的功效。

2。材料和方法

2.1。化学品和试剂

1,1-二苯基苦基肼 (DPPH˙) 购自 Sigma Co. (St. Louis, MO, USA)，甲醇购自 Merck (Darmstadt, Germany)。所有其他化学品和试剂均来自班加西大学化学系生化实验室。

2.2. 植物材料

P. lentiscus的叶子是从利比亚班加西市以东约 60 公里处的 Al-abyar 森林采集的。植物标本是在植物系（班加西大学理学院）植物标本室中鉴定的。

2.3. 植物提取物的制备

选择了两种极性溶剂（甲醇和水溶液）来提取所研究植物的化学成分。在提取之前，叶子已经用自来水充分洗涤并用蒸馏水冲洗，然后在室温（2527℃）阴凉处风干。根据 Vu等人的方法进行甲醇提取程序。[ 39] 稍作修改。在室温（25℃）下，用 100 毫升甲醇提取 10 克风干的植物粉末 48 小时。用 Whatman No.1 滤纸（Whatman Ltd.，England）过滤提取的悬浮液。使用旋转蒸发仪在不超过 40°C 的温度下干燥甲醇。甲醇在不高于 40°C 的温度下在旋转蒸发器中干燥。将干燥的提取物称重，计算提取物浓度，然后将其储存在无菌瓶中，并在 4°C 的冰箱中保存直至使用。对于水萃取，使用 Soxhlet 装置将 25 g 植物粉末与 250 mL 蒸馏水混合，并通过 Whatman No.1 滤纸过滤。使用 100°C 旋转蒸发器干燥水提取物。将干燥的提取物保存在 -4˚C 的无菌瓶中，直至进一步使用 [40 ]。

2.4. 提取物的多酚分析

2.4.1。总黄酮含量 (TFC) 的测定

张等人。[ 41 ] 已经使用氯化铝比色法来检查每种提取物的类黄酮含量材料。在室温下孵育 30 分钟后，将叶子提取物与 0.1 ml 10% 氯化铝、0.1 ml M 醋酸钾和 2.8 ml 蒸馏水混合，以 2 ml 的不同浓度“100, 200, 300、400、500 微克/毫升。” 使用紫外可见分光光度计在 415 nm 处测量响应组合的吸光度。总黄酮含量估计为 μg 槲皮素当量/ml P. lentiscus提取物。

2.4.2. 总酚含量 (TPC) 的测定

提取物的总酚含量通过基于 Folin-Ciocalteu (FC) 试剂的比色法进行测试 [ 42 ]。将 0.05 ml Folin-Ciocalteu 试剂与 0.05 ml 不同浓度的“100、200、300、400 和 500 μg/ml”混合。然后使用 0.4 毫升蒸馏水和 0.5 毫升 15% 钠将混合物调至 1 毫升。碳酸盐溶液。使反应静置10分钟后，使用可见紫外分光光度计在725nm处测量吸光度。酚类成分的总含量以 μg 连苯三酚当量/ml 的P. lentiscus提取物表示。获得的结果一式三份估计，并表示为具有标准偏差 (SD) 的平均值。

2.5. 体外抗氧化活性

2.5.1。降低功率测定 (RPA)

根据 Ara 和 Nur 方法计算降低的功率 [ 43 ]。将 2 ml 不同浓度（100、200、300、400 和 500 μg/ml）的叶提取物与 2.5 ml 磷酸盐缓冲液（0.2 M，pH 6.6）和 2.5 ml 铁氰化钾混合。然后将混合物在 50°C 水浴中孵育 20 分钟，然后以 3000 rpm 的转速离心 10 分钟。将 2.5 ml 上清液与 2.5 ml 纯净水和 1 ml FeCl 3混合，与铁氰化钾 (Fe 3+ ) 反应生成亚铁氰化钾 (Fe 2+)，然后与氯化铁一起使用具有 UVV 功能的分光光度计，得到在 700 nm 处具有最大均质化的铁金属络合物。针对抗坏血酸（维生素C）的标准校准曲线进行了评估。维生素C用于比较。

铁氰化钾+氯化铁-→----抗氧化剂亚铁氰化钾+氯化亚铁

2.5.2. DPPH 自由基清除活性 (RSA)

使用 Rao等人描述的 DPPH (diphenylpicrylhydrazyl) 方法测试叶子提取物的抗氧化能力。[ 44]。剧烈摇动含有 2 ml 不同浓度“100、200、300、400、500 g/ml”的每种提取物和 2 ml DPPH (0.2 mM) 的反应混合物，并在室温下避光孵育 30 分钟。当 DPPH 与供氢抗氧化剂化学物质反应时，它会被还原，导致用紫外-可见分光光度计测量的 517 nm 处的吸光度下降，并得出三个实验的平均值。将样品浓度与残留 DPPH 的比例作图。较低的值表示较大的抗氧化能力。清除活性估计为 DPPH 抑制百分比，并使用公式计算：

% DPPH“RSA”抑制 = [Abs. 控制 - 绝对值。样品/绝对值。控制] × 100

其中 Abs control 是没有提取物的 DPPH 的吸光度，Abs sample 是 DPPH 以及不同浓度的提取物的吸光度。IC 50值代表将自由基减少50%的抗氧化化合物的浓度，使用针对不同浓度提取物的DPPH抑制活性百分比计算。

2.6. 提取物的抗菌活性

2.6.1。微生物

使用革兰氏阳性菌评估抗菌活性：金黄色葡萄球菌( S. aureus )溶血性葡萄球菌( S. haemolyticus )，和革兰氏阴性菌：铜绿假单胞菌( P. aeruginosa ) 和奇异变形杆菌( P. mirabilis ) )，这是已知的抗生素抗性细菌。这些细菌种类来自班加西儿童医院的微生物实验室。在El-Jala教学医院使用标准方法分离和鉴定微生物，并使用凤凰确认它们的鉴定。

2.6.2. 提取物的抗菌活性评价

使用琼脂孔扩散法检测叶子提取物的抗菌作用 [ 45]。在将 100 μg 细菌悬浮液浸入平板（在营养琼脂上于 37°C 培养过夜培养物，并在无菌盐水中调整至 0.5 McFarland）后，通过在平板的整个表面上摩擦无菌棉签来接种 Muller Hinton 琼脂平板。使用直径为 9 mm 的无菌软木塞钻在琼脂中创建一个孔。将植物提取物以不同的量（25%、50%、75% 和 100%）添加到孔中，并将板在 37°C 下孵育 24 小时。左氧氟沙星（5μg）和氨苄青霉素用作阳性对照（10μg）。阴性对照包括纯甲醇溶剂和水溶液。在合适的条件下，每个浓度重复实验 3 次。对微生物的抗菌活性由孔周围的抑制区指示。46 ]。

2.7. 统计分析

GraphPad prism 版本 8.4.3 (686) 用于统计分析和结果的图形表示。使用 Tukey 检验的单因素方差分析 (ANOVA) 进行统计比较，所有检验在 P < 0.05 时均被认为具有统计学意义。所有结果均表示为一式三份的平均值±标准差 (SD)。使用 Pearson 相关系数 ( r ) 和决定系数 (R 2 ) 对数据进行评估，以确定抗氧化活性、总酚类和类黄酮含量之间的关系。

3. 结果

3.1。植物提取物的多酚成分

结果表明，扁豆甲醇提取物中总酚类和黄酮类化合物的含量高于 水提取物（表1）。此外，在两种提取物中，黄酮类和酚类成分的含量都随着浓度的增加而增加。

3.2. 植物提取物的抗菌活性

筛选植物提取物的抗菌活性结果总结在表 2和图 1 (a) 和图 1 (b) 中。关于使用的溶剂，

溶剂

浓度（微克/毫升）

总黄酮含量 (TFC)

总酚含量 (TPC)

DPPH 清除活性 (%)

减少

权力活动

集成电路50

(微克/毫升)

甲醇

100

0.273 ± 0.022

0.352±0.046

32.5

0.398 ± 0.033

189.62

200

0.482 ± 0.074

0.612 ± 0.062

49.4

0.605 ± 0.062

300

0.712 ± 0.083

0.843 ± 0.052

68.4

0.801 ± 0.043

400

1.021 ± 0.053

1.19 ± 0.034

85.0

0.971 ± 0.066

500

1.301 ± 0.026

1.35±0.066

92.0

1.32±0.045

水性

100

0.235 ± 0.083

0.253 ± 0.073

22.4

0.373 ± 0.044

363.07

200

0.344 ± 0.053

0.502 ± 0.022

32.3

0.618 ± 0.029

300

0.447 ± 0.023

0.772 ± 0.051

43.0

0.735 ± 0.059

400

0.788 ± 0.095

1.02±0.091

56.0

0.948 ± 0.028

500

0.972 ± 0.056

1.20 ± 0.027

67.0

1.21±0.055

维生素C（标准）

100

92.3

0.201 ± 0.028

57.93

200

93.8

0.495 ± 0.035

300

95.1

0.697 ± 0.008

400

95.8

0.992 ± 0.072

500

96.7

1.201 ± 0.030

表 1。与不同浓度的标准维生素 C 相比，总黄酮含量 ( TFC )、总酚含量 (TPC)、DPPH 自由基清除抑制百分比、还原能力、甲醇和黄连木水叶提取物的IC 50值。

溶剂/

抗生素

专注

(%)

抑菌圈直径 mm

革兰氏阳性菌

革兰氏阴性菌

金黄色葡萄球菌

溶血性链球菌

铜绿假单胞菌

奇异果_

甲醇

25

26.00 ± 1.00 (S)

21.33 ± 1.15 (S)

15.00 ± 1.00 (I)

12.66 ± 0.57 (R)

50

28.00 ± 1.73 (S)

24.66 ± 0.57(S)

15.33 ± 0.57 (I)

14.66 ± 0.57 (R)

75

29.33 ± 1.15 (S)

27.00 ± 0.00 (S)

17.33 ± 0.57 (I)

16.00 ± 0.00 (I)

100

33.33 ± 1.52 (S)

27.66 ± 1.52 (S)

18.66 ± 0.57 (I)

17.00 ± 1.00 (I)

水性

25

13.66 ± 0.57 (I)

16.66 ± 0.57 (I)

0.00 ± 0.00 (R)

12.00 ± 1.00 (R)

50

15.66 ± 0.57 (I)

18.00 ± 1.00 (I)

10.33 ± 0.57 (R)

13.66 ± 0.57 (R)

75

19.33 ± 0.57 (I)

19.33 ± 0.57 (I)

11.00 ± 1.00 (R)

15.33 ± 0.57 (I)

100

21.33 ± 0.57 (S)

23.00 ± 1.00 (S)

15.00 ± 1.00 (I)

18.33 ± 1.52 (I)

左氧氟沙星（5微克）

34.33 ± 0.57 (S)

33.00 ± 1.00 (S)

0.00 ± 0.00 (R)

36.33 ± 0.57 (S)

氨苄青霉素（10 微克）

15.33 ± 0.57 (R)

23.00 ± 0.00 (R)

0.00 ± 0.00 (R)

0.00 ± 0.00 (R)

表 2。Pistacia lentiscus叶子提取物和标准抗生素对测试细菌分离物的抗菌活性。

值表示为平均值 ± SD (N = 3)。括号中的字母代表 CLSI 指南协议推荐的临床断点（易感 (S)、中间 (I) 和耐药 (R)）。菌种：S 。金黄色葡萄球菌；金 黄色葡萄球菌、溶血 性葡萄球菌；溶血性葡萄球菌 _ _ 绿脓杆菌；Pseudomonas aeruginosa和P. mirabilis ; 奇异变形杆菌。

图 1。P. lentiscus甲醇 (a) 和水性 (b) 叶提取物对S的抗菌活性。金黄色葡萄球菌，溶血 性葡萄球菌， P . 绿脓杆菌和奇异假单胞菌 。

甲醇叶提取物对所有测试的细菌分离物的生长都显示出显着的抑制作用，在所有研究浓度下，其抑菌圈均高于水提物（表 2）。在浓度为 100% 的甲醇提取物中观察到对金黄色葡萄球菌 和溶血性葡萄球菌的最大抑菌圈分别为 33.33 毫米和 27.66 毫米。发现两种提取物对革兰氏阳性菌均在较高浓度下有效。此外，本研究结果表明，铜绿假单胞菌和奇异假单胞菌的抗菌抑制活性几乎相似。 并检测到直径的最低抑菌圈，尤其是所有使用浓度的水提取物。水叶提取物的结果还表明，在 25 的最低浓度下对铜绿 假单胞菌没有抑制活性。我们的研究结果进一步表明，与革兰氏阳性菌相比，革兰氏阴性菌对两种提取物的敏感性较低。

关于抗菌药敏试验结果，所有革兰氏阳性菌对标准抗生素左氧氟沙星的敏感性最高（100%），但对氨苄青霉素的耐药性最高（100%）。另一方面，本研究中测试的所有革兰氏阴性分离株都记录了对所有使用的标准抗生素的耐药性，除了奇异果 对左氧氟沙星敏感（表 2）。

3.3. 降低功率容量 (RPC)

在该测定中，提取物和维生素 C 的还原能力均取决于浓度（表 1）。增加 700 nm 处的吸光度表明还原功率活性增加。我们研究中的结果表明，与标准维生素 C 相比，两种提取物均显示出良好的还原能力。在较低（100 μg/ml）和较高（500 μg/ml）浓度下的还原能力活性为（0.398；1.32） , (0.373; 1.21) 和 (0.201; 1.201) 分别用于甲醇、水溶液和维生素 C。与水提物和标准品相比，甲醇叶提取物显示出更好的还原能力（图 2）。叶提取物与参比维生素 C 的差异无统计学意义（P > 0.05）。

3.4. DPPH˙ 自由基清除活性 (RSA)

DPPH˙自由基清除活性抑制百分率见表1。所有参数的百分比抑制DPPH清除能力以浓度依赖性方式增加。此外，在所研究的所有浓度下，甲醇和水提取物的自由基清除活性均低于标准维生素 C 的抗氧化能力。在终浓度为 500 μg/ml 时，标准维生素 C 显示出最高

图 2。P. lentiscus提取物在不同浓度下的还原能力我; 甲醇提取物，AE；水提取物，VC；维生素C（阳性标准），ns；叶提取物与参比维生素 C 无显着差异（ P > 0.05）。

对 DPPH 的清除效果为 96.7%，其次是甲醇和水叶提取物（分别为 92% 和 67%）（表 1和图 3）。叶提取物与标准抗氧化维生素 C 的差异有统计学意义（P < 0.01）。

图 3。通过 DPPH 自由基清除活性（抑制百分比），来自P. lentiscus叶子的 ME 和 AE 的抗氧化活性我; 甲醇提取物，AE；水提取物，VC；维生素C（阳性标准）。**通过方差分析（单向方差分析）和 Tukey 检验（n = 3），两种叶提取物和参考维生素 C 之间存在显着差异（ P < 0.01）。

使用 IC 50值进一步估计提取物的抗氧化能力，该值确定抑制 DPPH 活性达 50% 的抗氧化底物的浓度。较低的 IC 50值表明清除 DPPH 自由基的能力更强。如表 1所示，与甲醇和水提取物相比，维生素 C 表现出显着更高的自由基清除活性，最低 IC 50值为 57.93 μg/ml，其抑制作用的 IC 50值为 189.62 μg/ml 和 363.07 μg/ml。毫升，分别。

3.5. 扁豆 叶提取物抗氧化活性与总酚类和类黄酮含量的相关性

计算Pearson 相关系数 ( r ) 和决定系数 (R2 )以评估总酚含量 (TPC) 和总黄酮含量 (TFC) 以及还原能力 (RPC) 和 DPPH 自由基清除活性 (RSA) 之间的关系）。植物提取物的抗氧化特性可归因于 TPC 和 TFC。如表 3所示，本研究发现扁豆总酚和黄酮含量呈强正相关（r > 0.97，R 2 > 0.95，P < 0.01） 。 叶提取物和两种抗氧化活性测试（RSA和RPC）。此外，DPPH 自由基清除活性与还原能力密切相关（甲醇提取物，R 2 = 0.926，P < 0.01；水提取物，R 2 = 0.985，P < 0.01；维生素 C，R 2 = 0.976，P < 0.01）（图4(a)-(c))。这种关系与 TPC、TFC 和两种抗氧化活性之间的 Pearson 相关性一致（表 3），如高相关系数（R 2 > 0.92）所证明的那样。

(a)(b)(c)

图 4。与标准抗氧化剂维生素 C 相比， P. lentiscus两种叶子提取物的还原能力和 DPPH 自由基清除活性（抑制百分比）之间存在线性关系。**相关性在P < 0.01（双尾）时显着。

抗氧化剂测定

甲醇提取物

水提物

TPC

TFC

TPC

TFC

RSA

0.993*** (0.987)

0.979** (0.960)

0.995*** (0.991)

0.984** (0.968)

RPC

0.976** (0.952)

0.992*** (0.984)

0.984** (0.970)

0.977** (0.955)

表 3。Pearson 的相关系数 ( r ) 和测定系数 (R 2 ) 在抗氧化测定（RSA 和 RPC）与甲醇总酚含量 (TPC) 和总黄酮含量之间以及P. lentiscus的水叶提取物。

括号中的值代表R 2值。**相关性在P < 0.01（双尾）时显着；***相关性在P < 0.001（双尾）时显着。RSA，自由基清除活性（DPPH抑制百分比） ；RPC，降低功率容量。

4。讨论

植物化学化合物，主要是多酚，如黄酮类化合物和酚酸，在植物产品中含量丰富，并已被证明具有显着的

抗菌、抗氧化、抗炎、抗过敏、保肝、抗血栓、抗病毒、抗癌和扩张血管活性。许多这些生物学特性主要负责它们的抗氧化和自由基清除能力 [ 47 ] [ 48 ]。甲醇是提取抗菌药物的常用溶剂，它可能含有多种具有生物活性的化合物 [ 49 ] [ 50 ]。

根据我们的研究结果，两种测试提取物的植物化学分析表明存在大量多酚成分，主要是酚类和类黄酮。此外，P. lentiscus叶提取物的化学成分根据测试提取物和浓度的不同而有很大差异。甲醇叶提取物中的总酚类和黄酮类化合物高于水提取物。这与先前的研究 [ 29 ] [ 51 ] [ 52 ] [ 53 ] [ 54 ] 一致，该研究表明甲醇是从植物中提取生物活性化学物质（如酚类和类黄酮成分）的良好溶剂。

在所检查的所有浓度下， P. lentiscus甲醇叶提取物对所有测试微生物的抗菌效果均高于水提取物。抑制区的直径用于跟踪测试微生物对植物提取物的敏感性。P. lentiscus生长抑制因一种微生物而异，也因一种植物提取物而异。甲醇提取物的抑制区范围为 14.6 至 33.3 毫米，水提取物为 10.3 至 22.6 毫米，具体取决于浓度，但水提取物对铜绿 假单胞菌没有显着抑制作用以最低浓度 (25%) 分离。尽管效力低于甲醇提取物，但P. lentiscus的水提取物显示出抗菌作用。

此外，Jayalakshmi等人。[ 53 ] 研究了不同植物的各种溶剂提取物对人类病原菌的抗菌功效，并得出结论，几乎所有筛选出的植物的甲醇提取物都显示出对所有测试微生物的活性。同样，Parekh等人报告的进一步研究。[ 55 ] 表明，甲醇提取物的抗菌作用比水提取物更具活性。此外，其他研究显示了P. lentiscus叶子的甲醇 [ 56 ] [ 57 ] 和水提取物 [ 58 ] 的功效 由于多酚化合物的存在，可以对抗几种病原微生物。在我们之前的体外研究中，我们报道了使用丙酮叶提取物治疗P. lentiscus [ 59 ] 对金黄色葡萄球菌和铜绿 假单胞菌具有显着的抗菌能力，而另一项研究表明从P. lentiscus的丙酮叶提取物中未观察到抗菌活性。 lentiscus对肺炎克雷伯菌和大肠杆菌[ 30 ]。

此外，穆扎法尔等人。[ 60 ] 报道说，虽然某些植物的水提取物具有有限的抑制区，但其他植物在相同的提取物下对所有目标病原体表现出显着的抑制作用。在目前的调查中，革兰氏阳性菌被证明对所研究的提取物更敏感，并且比革兰氏阴性菌具有更大的抑制区。文献 [ 53 ] [ 61 ] [ 62 ]也报道了革兰氏阳性菌，特别是金黄色葡萄球菌对各种植物提取物的高度敏感性。

与这些发现相比，Farjana等人。[ 63 ] 表明，在 0.2 mg/ml 的浓度下，印楝子的甲醇提取物对金黄色葡萄球菌的抑菌圈较低（10mm） 。浓度、提取溶剂、使用的菌株和植物基因型都可能在这些不同的发现中起作用。革兰氏阴性菌的细胞壁比革兰氏阳性菌的细胞壁更不易受多种植物成分的影响，因为外膜层可作为对有害物质（包括抗生素）的保护屏障。

尽管许多研究表明，左氧氟沙星可有效治疗由铜绿假单胞菌引起的感染[ 46 ] [ 64 ] [ 65 ] [ 66 ] [ 67 ]，但左氧氟沙星对铜绿假单胞菌分离物的体外活性并未显示出 任何抑制作用在我们的实验中效果。阿特夫等人。[ 68 ] 报告说奇异果对几种抗生素敏感，包括左氧氟沙星，这与本次调查的结果一致。在同一实验中，1 个分离株 (7.69%) 的 13 P. 绿脓杆菌菌株被证明对左氧氟沙星具有抗药性。医院和社区中不受控制的使用可能导致抗生素耐药性的发展和传播。

有趣的是， P. lentiscus的甲醇叶提取物对 ABR P. aeruginosa和P. mirabilis表现出比使用的抗生素更广谱且有效的抗菌作用。这些革兰氏阴性细菌，尤其是铜绿 假单胞菌分离物，被证明对所有测试的抗生素完全耐药。P. lentiscus的显着效果针对这些 AB-R 致病细菌分离物的提取物可以为细菌性疾病提供一种重要的新治疗选择。一般来说，植物提取物，特别是甲醇的抗菌作用可归因于酚类和黄酮类化学物质，它们对所检查的微生物具有拮抗作用。

A DPPH (diphenylpicrylhydrazyl) 和降低抗氧化能力的方法被用于P. lentiscus植物提取物。已被公认为评估植物提取物抗氧化能力的有效方法 [ 69 ]。自由基可以在生物系统中造成体内损伤，因此被认为是多种疾病的原因。因此，为了保护生命系统，抗氧化分子必须 [ 70]。在目前的调查中，我们检查了提取物和参考维生素 C 在不同浓度下清除自由基的能力。抑制百分比是测量植物提取物和能够清除或抑制自由基的标准的性质。我们的研究结果表明，叶子提取物和标准品对 DPPH 清除能力的抑制百分比表现出对 DPPH 活性的显着浓度依赖性抑制。

我们的研究结果还表明，在 500 g/ml 的浓度下，扁豆维生素 C 和甲醇提取物的标准具有很强的自由基清除活性，维生素 C 和甲醇提取物的抗氧化百分比分别为96.7 % 和 92% . 维生素 C，其次是甲醇提取物，在所有研究的P. lentiscus浓度下都具有出色的抗氧化能力（% DPPH 自由基抑制） ，而水提取物具有弱到中等的抑制作用。这些结果可能说明提取物含有的化学物质似乎可以作为这些样品更好的电子和氢供体能力，因此可能是它们有效抗氧化作用的来源。

还原能力测定是抗氧化活性的一个关键特征，是另一种与电子/氢供体能力相关的测定。抗氧化剂的还原能力是使用铁氰化钾 (Fe 3+ ) 还原法在P. lentiscus叶的甲醇和水提取物和维生素 C 标准品存在下通过转化铁离子 (Fe 3+ ) 到亚铁离子 (Fe 2+）。700 nm 处吸光度的增加表明还原能力的增加。根据 DPPH 自由基抑制百分比的结果，还原力测定还显示出抗氧化活性以浓度依赖性方式增加（表 1）。根据我们的研究结果，两种提取物的还原能力，特别是甲醇提取物，比合成维生素 C 具有更高的还原能力，表明提取物可能具有更强的抗氧化活性。

这些发现证实了先前的发现，即P. lentiscus的甲醇叶提取物具有最高的抗氧化活性和利用 DPPH 自由基清除和还原能力的还原能力，其特征在于酚类和类黄酮成分的存在 [ 29 ] [ 51 ] [ 71 ] . 由于其作为药用植物重要的生物活性成分的独特性质，酚类化合物被认为是有效的链断裂和自由基终止剂抗氧化剂[ 72 ]。

IC 50值通常用于评估测试样品的抗氧化活性。它被定义为抑制 50% DPPH 活性所需的底物量。结果，IC 50值越低，抗氧化活性越高。根据 Marjoni 和 Zulfisa [ 73 ]，效力抗氧化能力可表征为高活性（50 g/ml）、活性（50 - 100 μg/ml）、中等（101 - 250 μg/ml）、弱（250 - 500 μg/ml）和非活性（>500 μg/ml）基于 IC 50值。参考维生素 C 具有最高的抗氧化能力，其 IC 50值为 57.93 μg/ml，其次是甲醇提取物，其 IC 50值为 189.62 微克/毫升。水提取物具有最低的自由基清除活性，IC 50值为 363.07 μg/ml。

水提取物的低活性可归因于多酚氧化酶，它水解水提取物中的多酚，而在甲醇中没有活性 [ 74 ]。溶剂的高极性已被证明对植物材料活性产生负面影响 [ 75 ]，降低提取物中总酚和类黄酮的含量，从而降低抗氧化活性 [ 76 ] [ 77 ]。本研究的结果表明，尽管水提物显示出弱强的 DPPH 自由基清除能力，IC50 值为 363.07 μg/ml，但其活性已被报道，这与之前的研究结果一致 [ 73 ] [ 78 ]]，表明 200 - 1000 μg/ml 的 IC50 值被宣布为活性较低，但仍具有作为抗氧化剂的潜力。

因此，多酚，主要是酚类和类黄酮成分可以直接有助于潜在的抗氧化特性。这些多酚类化合物主要可以通过还原剂、氢供体和自由基清除剂等多种途径作为抗氧化剂，从而通过螯合促氧化剂金属离子和抑制某些酶来降低培养基的氧化还原电位，这也可能会限制培养基的生长。微生物病原体 [ 79 ] [ 80 ]。如表3所示，目前的研究发现总酚类和类黄酮含量与 RSA（% DPPH 抑制）和 RPC（降低功率能力）之间存在密切关联。几项研究发现总酚和类黄酮含量与植物提取物的抗氧化能力之间存在直接关联 [ 81 ] [ 82 ]，而其他研究发现总酚 [ 83 ] 或类黄酮 [ 84 ] 含量与其体外抗氧化剂之间没有相关性活动。

此外，我们的研究结果表明，提取物和标准品的总酚和黄酮含量与其抗氧化活性之间存在显着的线性相关（r > 0.97，R 2 > 0.93，P < 0.01）。此外，在两种提取物和参考维生素 C 中，DPPH 自由基清除活性（抑制百分比）与降低功率能力之间观察到线性关系（图 4(a)-(c)）。因此，本研究表明，酚类和黄酮类化合物构成单独或协同相互作用，显着有助于P. lentiscus的抗氧化和抗菌能力叶提取物。与水提取物相比，甲醇提取物显示出重要的抗菌和抗氧化活性来源。

我们研究的一个局限是我们无法测量抗氧化酶的活性，如超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶和谷胱甘肽还原酶，这为一些具有抗氧化作用的植物提取物预防氧化应激的机制提供了更多的知识。特性。

5. 结论

甲醇提取物比水提取物表现出更强的抗菌和抗氧化特性。这可能是由于甲醇提取物具有最高浓度的总酚类和类黄酮化合物。因此，需要更多的活性成分分离和表征以及体内 研究来确定抗菌和抗氧化作用的机制。

利益冲突

作者声明与本文的发表没有利益冲突。

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